PCR

PCR (Polimeraz Zincir Reaksiyonu) ve moleküler test aynı kavramı ifade eder. Moleküler test, biyolojik materyallerden (DNA, RNA, proteinler veya yağlar) örnekler alınarak, bu materyallerin yapısını ve özelliklerini inceleyen testleri kapsar.

PCR testi için hem burundan hem de boğazdan sürüntü örneği alınabilir. Test sırasında, ucu pamuklu ince bir çubuk kullanılarak burun ve boğazdan sürüntü örnekleri alınır.

Gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu (Real-time PCR), polimeraz zincir reaksiyonuna (PCR) dayanan bir moleküler biyoloji laboratuvar tekniğidir. Temel prensibi, hedeflenen bir DNA molekülünün amplifikasyonunu PCR'da olduğu gibi sonunda değil, reaksiyon sırasında (yani gerçek zamanlı olarak) izlemektir. Bu teknik, hastalıkların teşhisinde, DNA haritalama ve dizi analizinde, adli tıpta suçlu profillerinin çıkarılmasında ve diğer birçok alanda kullanılmaktadır.

16S rDNA PCR ile ayırt edilebilen bazı bakteriler: Staphylococcus; Corynebacterium; Propionibacterium; Streptococcus; Bacillus; Acinetobacter; Pseudomonas; Proteus; Brevundimonas. Ayrıca, 16S rDNA dizileme yöntemi, nadir ve bilinmeyen bakterilerin tanımlanmasında da kullanılır. 16S rDNA PCR ile bakteri ayrımının başarısı, kullanılan primerler ve analiz edilen gen bölgeleri gibi faktörlere bağlıdır. 16S rDNA PCR'nin, standart PCR protokollerine göre sınırlı bir duyarlılığa sahip olduğu dikkate alınmalıdır.

RT-PCR (Reverse Transcription PCR) ve qPCR (Kantitatif PCR) arasındaki temel farklar şunlardır: 1. Başlangıç Materyali: RT-PCR, RNA ile çalışırken, qPCR hem DNA hem de RNA ile çalışabilir. 2. Enzimler: RT-PCR, ters transkriptaz ve DNA polimeraz enzimlerini kullanırken, qPCR sadece DNA polimeraz enzimini kullanır. 3. Amplifikasyon: RT-PCR, RNA'nın cDNA'ya dönüştürülmesinden sonra amplifikasyon yaparken, qPCR doğrudan DNA veya cDNA'nın amplifikasyonunu izler. 4. Gerçek Zamanlı İzleme: qPCR, amplifikasyon sürecini gerçek zamanlı olarak izler ve floresan problar veya boyalar kullanarak miktarı ölçer, RT-PCR ise sadece amplifikasyonun sonunda sonuç verir. 5. Duyarlılık: qPCR, daha hassas olup düşük seviyelerde DNA veya RNA moleküllerini tespit edebilirken, RT-PCR sadece dönüştürülmüş cDNA moleküllerini tespit edebilir.

Omicron varyantını tespit eden test, PCR testidir. Ayrıca, hızlı antijen tespit testleri de Omicron varyantının teşhisinde kullanılabilir, ancak bu testlerin kesin sonuç vermesi için tam gen dizilimi yapılması gerekebilir.

Domuz gribi PCR testinin sonuçlanma süresi genellikle 24-48 saat arasında değişmektedir.

PCR'da kantitatif ifadesi, gerçek zamanlı PCR (qPCR) yöntemini ifade eder. qPCR, DNA amplifikasyonunun gerçek zamanlı olarak izlenmesini sağlayan bir tekniktir. Böylece, qPCR sayesinde bir örnekte bulunan DNA miktarı hakkında gerçek zamanlı veriler elde edilir ve başlangıçtaki şablon konsantrasyonu hesaplanabilir.

İnfluenzada PCR testi, hastalığın ilk dört gününde, özellikle semptomların başlamasından itibaren 9-10 gün içinde yapılmalıdır. Ayrıca, komplikasyon riski yüksek olan hastalarda ve hastaneye yatırılan olgularda da influenza testi önerilir.

PCR (Polimeraz Zincir Reaksiyonu) aşamaları üç ana bölümden oluşur: 1. Denatürasyon (Bozulma) Aşaması. 2. Bağlanma Aşaması. 3. Uzama Aşaması.

Multiplex PCR aşağıdaki alanlarda kullanılır: 1. Patojen tespiti ve tanımlaması. 2. SNP genotiplemesi. 3. GMO (genetik olarak modifiye edilmiş organizmalar) analizi. 4. Mutasyon ve polimorfizm analizi. 5. Kalıtımsal analiz. 6. Bağlantı analizi. 7. Forensik çalışmalar.

PCR (Polimeraz Zincir Reaksiyonu) yönteminde DNA polimeraz enzimleri kullanılır. En yaygın olarak kullanılan DNA polimeraz, Taq DNA polimeraz'dır ve bu enzim, Thermus aquaticus bakterisinden elde edilir.

PCR'da 30 döngü genellikle yeterlidir, eğer başlangıçtaki DNA molekülü sayısı 1.000 ile 100.000 arasında ise. Ancak, istenen DNA dizisinin çoğaltılması için optimal döngü sayısı, kullanılan malzemelere, primerlere ve PCR'ın amacına bağlı olarak değişebilir.

İnvitrotek, moleküler diagnostics ve genetik test pazarında satış ve pazarlama faaliyetleri yürüten bir şirkettir. Şirketin sunduğu bazı hizmetler: - Çoklu PCR yöntemleri ile genomik analiz. - Next-generation sequencing (NGS) teknolojileri. - Araştırma amaçlı çeşitli test panelleri. - İlaç bağımlılığı testi. İnvitrotek, İstanbul, Türkiye merkezli olup, 2009 yılında kurulmuştur.