İn vitro embriyo kültüründe etkili olan faktörler şunlardır: 1. Enerji Kaynağı ve Gaz Bileşimi: Embriyo için uygun bir ortam sağlamak amacıyla glikoz ve %5 CO2 kullanılır. 2. Antibiyotik Kullanımı: Gentamisin yerine penisilin, streptomisin kombinasyonları veya amfoterisin-b, kanamisin gibi antibiyotikler tercih edilmelidir. 3. Sıcaklık ve Çevresel Koşullar: Kültür ortamının sıcaklığı 39°C civarında olmalı, ani sıcaklık değişimlerinden kaçınılmalıdır. 4. Maturasyon Ortamının Ozmotik Değeri: Maturasyon ortamının ozmotik dengesi, oositlerin gelişimi için önemlidir. 5. Hormon ve Büyüme Faktörleri: FSH, LH, östrojen ve progesteron gibi hormonlar, embriyonun gelişimi için eklenir. 6. Protein Katkıları: Sığır serumu ve sığır serum albümini, kültür ortamında protein yokluğunda embriyonun metabolik aktivitesini ve gelişim kapasitesini artırır. Bu faktörlerin optimize edilmesi, in vitro embriyo üretiminin başarısını artırır.