LaboratuvarTeknikleri

Sitosantrifüj yöntemi, sıvı içindeki hücreleri konsantre ederek bir mikroskop lamı üzerinde tek tabaka halinde toplamak için kullanılan bir yöntemdir. Bu yöntem şu şekilde uygulanır: 1. Bir mikroskop lamının önüne bir huni düzeneği takılır ve bu düzeneğin yüzeyi fazla sıvıyı emmek için filtre kağıdı ile kaplanır. 2. Huniye birkaç damla sıvı konur. 3. Tertibat, sitosantrifüje yerleştirilir ve düşük bir güçte (600–800 xg) çalıştırılır. 4. Santrifüj kuvveti, sıvıyı huninin açıklığından iter ve hücreleri sürgünün küçük bir alanında yoğunlaştırır. 5. Santrifüjleme işlemi, hücreleri yaklaşık yirmi kat konsantre eder. 6. Slayt daha sonra sabitlenebilir ve boyanabilir.

Metalografik numune hazırlama aşamaları şunlardır: 1. Numune Kesimi: İncelenecek malzemeden uygun boyutta numuneler alınır. 2. Bakalite Alma: Küçük veya şekilsiz numuneler, rahat işlenebilmek için uygun bir reçine içine gömülür. 3. Zımparalama: Numunenin yüzeyindeki pürüzler, gittikçe inceleşen zımpara kağıtları kullanılarak giderilir. 4. Parlatma: Zımparalama işleminin ardından, yüzeyi daha da düzgün ve parlak hale getirmek için parlatma işlemi yapılır. 5. Dağlama: Mikroyapı ile ilgili bir tayin yapılacaksa, numunenin yüzeyi çeşitli asitler ile dağlanıp net bir şekilde ortaya çıkarılır. 6. Son Temizlik: Numune, mikroskobik incelemeye hazır hale gelmek için temizlenir. 7. Mikro Yapı Analizi: Son aşamada, numune optik mikroskop, elektron mikroskobu veya diğer analiz cihazları kullanılarak incelenir.

LDH sitotoksisite kiti, laktat dehidrojenaz (LDH) enziminin salınımını ölçerek hücre cytotoksisitesini tespit etmek için kullanılan bir kittir. Bu kitler, genellikle aşağıdaki adımları içerir: 1. Hücre kültürü: Hücreler, toksik maddelere maruz bırakılır ve ardından kültür ortamı değiştirilir. 2. LDH ölçümü: Kültür ortamına salınan LDH, WST substratı gibi reaktifler kullanılarak ölçülür. 3. Absorbanz ölçümü: Oluşan formazan miktarı, spektrofotometre veya plaka okuyucu ile 450 nm dalga boyunda ölçülür. Bu kitler, çeşitli hücre tipleri ve 3D modeller üzerinde cytotoksisite analizi yapmak için kullanılabilir.

Hücre zarının parçalanması (lizis) için kullanılan yöntemler şunlardır: 1. Mekanik Yöntemler: - Mikro-Akışkanlaştırıcı (Microfluidizer): Yüksek basınç ve mikro kanallar kullanarak hücre zarını parçalar. - Boncuk bilyalı öğütme (bead milling): Seramik veya metal boncukların partikülleri ezmesi yoluyla hücreleri parçalar. - Sonikasyon: Ultrasonik dalgaların kuvvetlerini kullanarak hücreleri parçalar. 2. Fiziksel Yöntemler: - Yüksek basınçlı homojenizasyon: Hücreleri yüksek basınçlarda dar bir kanaldan geçmeye zorlayarak parçalar. - French press: Yüksek basıncı dar bir kanalla birleştirerek hücreleri parçalar. 3. Kimyasal Yöntemler: - Enzimler: Hücre zarındaki bağları parçalayarak lizise neden olur.