300 Spartalı, Termofil Geçidi'nde (Termopylai Muharebesi) Sparta kralı I. Leonidas'ın komutasında, Yunan şehir devletleri ittifak kuvvetlerini yönetmiştir. MÖ 480 yılında gerçekleşen Termopylai Muharebesi'nde, 300 Spartalı ve diğer Yunan askerleri, Pers kralı I. Serhas'ın devasa ordusuna karşı üç gün boyunca cesurca savaşmışlardır. İlk iki gün boyunca, üstün zırh ve silah avantajları sayesinde Pers ordusunu durdurmuşlardır. Leonidas, kuvvetlerinin büyük bir kısmını geri çekmiştir; kendisi ve 300 Spartalı ile birlikte birkaç asker, geri çekilişi savunmak için geride kalmıştır. 300 Spartalı'nın kahramanca direnişi, Yunan şehir devletlerine zaman kazandırmış ve Salamis Deniz Muharebesi'nde Pers donanmasının yenilgiye uğratılmasına olanak tanımıştır.