Buradasın
Bradford yöntemi ile protein miktarı nasıl hesaplanır?
Yazeka
Arama sonuçlarına göre oluşturuldu
Bradford yöntemi ile protein miktarı, aşağıdaki adımlar izlenerek hesaplanır:
- Bradford reaktifinin hazırlanması: 100 mg Coomassie Brilliant Blue G-250'nin 50 mL %95 etanol ve 100 mL %85 fosforik asit ile çözülmesi 12.
- Standart protein çözeltilerinin hazırlanması: Bovine Serum Albumin (BSA) stok çözeltisinin distile su ile seyreltilerek 0.2, 0.4, 0.6, 0.8 ve 1.0 mg/mL konsantrasyonlarında standart çözeltiler oluşturulması 1.
- Protein numunesinin dilüsyonu: Protein numunesi, distile su ile uygun bir konsantrasyona kadar seyreltilir 1.
- Numune ve standartların ölçülmesi: 20 µL numune veya BSA standardı, 980 µL distile su içeren bir küveteye eklenir ve üzerine 1 mL Bradford reaktifi eklenerek iyice karıştırılır 1. Karışım, oda sıcaklığında 5 dakika bekletilir 14.
- Absorbanstan standart eğrinin oluşturulması: Numunelerin ve standartların 595 nm dalga boyunda absorbansları ölçülür ve bu değerler, BSA standart çözeltilerinin konsantrasyonlarına karşı grafiklenir 14.
- Protein konsantrasyonunun hesaplanması: Numunenin absorbans değeri, standart eğri kullanılarak bilinen konsantrasyonlarla karşılaştırılır ve protein konsantrasyonu belirlenir 14.
5 kaynaktan alınan bilgiyle göre: