300 Spartalı filmi, MÖ 480 yılında gerçekleşen Thermopylae Muharebesi'ni konu alır. Filmde anlatılan hikaye şu şekildedir: Pers Kralı Xerxes, Yunan krallıklarına saldırır. Sparta Kralı Leonidas, 300 Spartalı askerle Thermopylae'de Perslilerle savaşmaya karar verir. Şartlar ne kadar zor olursa olsun ve ölüm riski taşısa da bu 300 asker, Perslilerle savaşmaya hazırdır. Ancak film, tarihsel bilgi vermek amacıyla çekilmemiştir. Ayrıca, 300 Spartalı'nın öyküsü, zamanla mitolojik bir kahramanlık anlatısına dönüşmüştür.