• Buradasın

    PCR'ın çalışma prensibi nedir?

    Yazeka

    Arama sonuçlarına göre oluşturuldu

    PCR (Polimeraz Zincir Reaksiyonu), DNA dizilerinin in vitro koşullarında çoğaltılması esasına dayanır ve üç ana aşamadan oluşur 15:
    1. Denatürasyon: Kalıp DNA, 92-95 °C'de 1-2 dakika tutularak çift sarmal yapıdaki DNA iplikçikleri birbirinden ayrılır 15.
    2. Primerlerin Bağlanması (Annealing): Reaksiyon sıcaklığı 37-65 °C'ye düşürülerek oligonükleotid primerleri, açılan DNA zincirlerinin kendi baz dizilerine karşılık gelen bölgeye yapışır 15.
    3. Primer Uzaması (Extension): DNA zincirleri üzerine yapışan primerler, DNA polimeraz enzimi (Taq DNA polymerase) vasıtasıyla uzatılır 15.
    Bu işlem, genel olarak 25-40 defa tekrar edilerek başlangıçtaki DNA dizisinden milyonlarca yeni DNA parçacığı çoğaltılır 15.

    Konuyla ilgili materyaller

    ΔΔCT yöntemi nedir?

    ΔΔCT yöntemi, kantitatif polimeraz zincir reaksiyonu (qPCR) analizinde kullanılan bir tekniktir. ΔΔCT değerinin hesaplanması şu adımları içerir: 1. ΔCT hesaplaması: Hedef gen ile referans gen arasındaki CT (eşik döngüsü) farkının bulunması. 2. Referans örneğe göre karşılaştırma: Hesaplanan ΔCT değerlerinin, referans örneklerin ΔCT değerleriyle karşılaştırılması. Sonuç olarak, ΔΔCT değeri, deneysel koşulların kontrol örneğine göre kat değişimini temsil eder ve fold change olarak adlandırılır.

    RT PCR yöntemi nasıl çalışır?

    RT-PCR (Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction) yöntemi, RNA'nın DNA'ya dönüştürülmesi ve ardından bu DNA'nın çoğaltılması prensibine dayanır. Çalışma adımları: 1. Ters Transkripsiyon (RT): RNA, ters transkriptaz enzimi kullanılarak cDNA'ya dönüştürülür. 2. PCR Amplifikasyonu: cDNA, PCR reaksiyonu ile çoğaltılır. 3. Floresan Ölçüm: Çoğaltılan ürün, gerçek zamanlı PCR cihazlarında floresan boyalar kullanılarak ölçülür. RT-PCR, gen ekspresyonunun analizi, viral yükün izlenmesi ve tanı amaçlı uygulamalarda yaygın olarak kullanılır.

    RT-qPCR ne için kullanılır?

    RT-qPCR (quantitative reverse transcription PCR), çeşitli alanlarda kullanılan bir laboratuvar tekniğidir: Gen ifadesi seviyesinin ölçülmesi. RNA parazitinin (RNAi) doğrulanması. Patojenlerin tespiti. Genetik olarak değiştirilmiş organizmaların (GMO) tespiti. Ayrıca RT-qPCR, ilaç discovery ve kanser fenotiplemesi gibi alanlarda da yaygın olarak uygulanmaktadır.