"Kurtlar Vadisi: Gladio" filmi, derin devlet ajanı İskender Büyük'ün, yıllarca hizmet ettiği Gladio örgütüyle hesaplaşma hikayesini anlatıyor. Filmde, İskender Büyük'ün, karanlık geçmişi nedeniyle sanık sandalyesine oturtulduğunda yanında sadece genç ve tecrübesiz avukat Ayşe'nin olması ve bu durumla ilgili gerçekleri bir bir anlatması konu ediliyor.