Kurtlar Vadisi Gladio, bir derin devlet ajanının, yıllar boyu bilmeden hizmet ettiği Gladio adlı örgütle hesaplaşma hikayesini anlatır. Filmde, İskender Büyük karakterinin geçmişi ve Gladio'nun Türkiye'deki faaliyetleri ele alınmaktadır. Ancak film, eleştirmenler tarafından abartılı ve kaba bir üsluba sahip, mevcut siyasi gerilimi fırsat bilen bir milliyetçilik sömürüsü olarak değerlendirilmiştir.