Bir Zamanlar İstanbul dizisi, 1990'lı yılların İstanbul'unda geçen ve adalet, intikam ile toplumsal mücadele temalarını işleyen bir hikayeye sahiptir. Dizinin konusu: İstanbul Üniversitesi Edebiyat Fakültesi'nde okuyan, öğretmen olmayı hedefleyen idealist Ali'nin, ailesinin organize suç çeteleri tarafından hedef alınmasıyla değişen hayatı ve adalet arayışı; Ali'nin, zalimler karşısında Köroğlu misali bir mücadeleye girişmesi; Radyocu Seher'in, halkın sesi olma çabası ve Ali'nin adalet mücadelesinde ona destek vermesi. Dizi, birebir gerçek bir olaya dayanmamakta, ancak 90'lı yılların toplumsal gerçekliklerinden izler taşımaktadır.