• Buradasın

    TRIzol reaktifi ne işe yarar?

    Yazeka

    Arama sonuçlarına göre oluşturuldu

    TRIzol reaktifi, toplam RNA'nın (ve ayrıca DNA ile proteinlerin) izolasyonu için kullanılan bir kimyasal çözeltidir 34.
    Bu reaktifin başlıca işlevleri:
    • Hücrelerin parçalanması ve nükleazların inhibe edilmesi 15;
    • RNA bütünlüğünün korunması 15;
    • RNA veriminin artırılması 3.
    TRIzol reaktifi, özellikle mikroRNA dizilimi ve tüm transkriptom dizilimi gibi uygulamalarda, RNA saflığını artırmak için ek saflaştırma adımlarıyla birlikte kullanılır 1.

    Konuyla ilgili materyaller

    Trizol yöntemi ile DNA izolasyonu nasıl yapılır?

    TRIzol yöntemi ile DNA izolasyonu şu adımlarla gerçekleştirilir: 1. Kültür Hazırlığı: 50 ml bakteri kültürü gece boyunca yetiştirilir ve hücreler santrifüj ile çöktürülür. 2. Lizis: 2 ml TRIzol reaktifi eklenir ve lizat, 5 ml'lik bir şırınga ve 21 gauge iğne ile üç kez geçirilerek parçalanır. 3. Faz Ayrımı: Lizat iki mikro santrifüj tüpüne aktarılır, 0.2 ml kloroform eklenir, tüpler çalkalanır ve 3 dakika oda sıcaklığında bekletilir. 4. Santrifüj: Örnekler, 4°C'de veya oda sıcaklığında maksimum hızda 15 dakika santrifüj edilir. Üstteki sulu faz yeni tüplere aktarılır. 5. RNase Eklenmesi: Son konsantrasyon 25 µg/ml olacak şekilde DNase-free RNase eklenir ve 37°C'de 30 dakika inkübe edilir. 6. Precipitasyon: 1 ml TRIzol için 0.5 ml izopropanol eklenir, 10 dakika oda sıcaklığında bekletilir ve maksimum hızda 10 dakika santrifüj edilir. 7. Yıkama: DNA peleti bir kez 75% etanol ile yıkanır ve maksimum hızda 5 dakika santrifüj edilir. 8. Kurutma ve Çözündürme: Pelet hava ile kurutulur ve su ile yeniden çözündürülür. Bu yöntem, plazmid DNA'nın saf ve kısıtlama analizi, radyolabelleme ve ligasyon için uygun olmasını sağlar.