Buradasın
PBMC izolasyonu nasıl yapılır?
Yazeka
Arama sonuçlarına göre oluşturuldu
Periferik Kan Mononükleer Hücreleri (PBMC) izolasyonu için aşağıdaki adımlar izlenir:
- Numune Hazırlığı: Kan örneği, EDTA içermeyen bir tüpte alınmalı ve hemen işleme konulmalıdır 12. Numune, oda sıcaklığında (18-22°C) tutulmalı ve sedimantasyonu önlemek için hafifçe karıştırılmalıdır 1.
- Santrifüj: Düşük hızlı (300-400 × g) ve 20-30 dakika süreli bir santrifüj işlemi yapılır 12. Bu, kan bileşenlerinin yoğunluğa göre ayrılmasını sağlar 1.
- Density Gradient Ortamı: Ficoll-Paque gibi bir density gradient ortamı kullanılır 13. Bu ortam, tüpün dibine eklenir ve üzerine kan örneği katmanlandırılır 3.
- PBMC Katmanının Ayrılması: Santrifüj sonrası, plazma ve eritrositlerin altında kalan PBMC katmanı dikkatlice pipet ile alınır 13.
- Yıkama ve Resüspansiyon: PBMC katmanı, kalan density gradient ortamı ve plazma proteinlerinden arındırmak için birkaç kez yıkanır ve uygun bir tampon çözelti ile yeniden süspanse edilir 12.
- Kalite Kontrolü: İzole edilen hücrelerin canlılığı ve saflığı, flow sitometri veya Trypan blue gibi yöntemlerle kontrol edilir 12.
Bu işlem, özel ekipman ve reaktifler gerektirir, bu nedenle laboratuvar koşullarında deneyimli personel tarafından yapılmalıdır.
5 kaynaktan alınan bilgiyle göre: