• Buradasın

    CTAB yöntemi ile RNA izolasyonu nasıl yapılır?

    Yazeka

    Arama sonuçlarına göre oluşturuldu

    CTAB yöntemi ile RNA izolasyonu için genel adımlar:
    1. Hazırlık:
      • CTAB tamponunu (yaklaşık 1 mL/numune) Falcon tüpüne ekleyin ve %2 (v/v) β-merkaptoetanol ile karıştırın 2.
      • Tüpleri 4°C'de santrifüje hazırlayın 2.
    2. Ekstraksiyon:
      • 750 µL CTAB tamponunu, 0,5-1 g sıvı azotla ezilmiş dokuya ekleyin ve vorteksle karıştırın 15.
      • Tüpleri 65°C su banyosunda 10 dakika inkübe edin, periyodik olarak vorteksleyin 2.
      • Her tüpe eşit miktarda (750 µL) kloroform : izoamil alkol (24:1) ekleyin ve iyice vorteksleyin 2.
      • Tüpleri 21.000g'da (yaklaşık 14.000 rpm) 10 dakika santrifüj edin 2.
    3. RNA Saflaştırma:
      • Sulu fazı yeni bir tüpe aktarın 2.
      • 60 µL 5M potasyum asetat ve 100 µL soğuk mutlak etanol ekleyin, tekrar vorteksleyin 15.
      • Tüpleri buzda 15 dakika inkübe edin 5.
      • 600 µL fenol:kloroform:izoamil alkol (25:24:1) ekleyin, vorteksleyin ve buzda 30 dakika inkübe edin 15.
      • Tüpleri 16.000xg'da 20 dakika santrifüj edin 5.
    4. Son İşlemler:
      • Üst tabakayı yeni bir mikro santrifüj tüpüne aktarın 5.
      • 8M lityüm klorür ekleyerek son konsantrasyonu 3M'ye çıkarın 5.
      • RNA peleti iki kez soğuk %76 etanol ile yıkayın ve havayla kurutun 5.
      • 100 µL DEPC ile işlenmiş su ekleyerek RNA peletini çözün 5.
    CTAB yöntemi
    5 kaynaktan alınan bilgiyle göre:

      Yanıtı değerlendir

      5 kaynak

      1. pubmed.ncbi.nlm.nih.gov
        1
      2. zymoresearch.de
        2
      3. adm.atauni.edu.tr
        3
      4. journals.plos.org
        4
      5. researchgate.net
        5

    Konuyla ilgili materyaller

    RNA izolasyonu için hangi yöntem kullanılır?

    RNA izolasyonu için kullanılan bazı yöntemler şunlardır: Trizol ile RNA izolasyonu yöntemi. Guanidine tiyosiyanat yöntemi. Proteinaz K yöntemi. Sezyum klorid gradient pürifikasyonu. Ayrıca, ticari kitler de RNA izolasyonu için kullanılmaktadır. RNA izolasyonu sırasında, RNazlardan korunmak için özel önlemler alınmalıdır; bu nedenle, RNaz içermeyen malzemeler ve DEPC ile hazırlanmış solüsyonlar kullanılmalıdır.
    5 kaynak

    RNA için hangi lizis solüsyonu kullanılır?

    RNA izolasyonu için kullanılan bazı lizis solüsyonları: Guanidyum tiyosiyanat içeren solüsyonlar. Hipotonik solüsyonlar. Lizis buffer (Hirt buffer). RNA izolasyonu sırasında kullanılan tüm solüsyonlar, RNaz aktivitesini yok eden dietilpirokarbonat (DEPC) ile hazırlanmalıdır.
    5 kaynak

    RNA nedir ve ne işe yarar?

    RNA (Ribonükleik Asit), nükleotitlerden oluşan bir polimerdir ve hücre içinde birçok önemli biyolojik rol oynar. Başlıca işlevleri: Protein sentezi: DNA'daki genetik bilginin proteine çevrilmesinde aracı olur. Enzim işlevi: Bazı RNA molekülleri, kimyasal reaksiyonları hızlandırarak enzim gibi davranır (ribozimler). Gen düzenlemesi: RNA, genlerin ne derece aktif olduğunu düzenlemeye yardımcı olur. Hücresel süreçlerin düzenlenmesi: Hücre bölünmesi, farklılaşma, büyüme, hücre yaşlanması ve ölüm gibi süreçlerde rol oynar. RNA türleri: Haberci RNA (mRNA): DNA'daki genetik bilgiyi ribozomlara taşır. Ribozomal RNA (rRNA): Ribozomların yapısında yer alır. Taşıyıcı RNA (tRNA): Amino asitleri ribozoma taşır. RNA, DNA'ya benzer ancak bazı yapısal farklılıklar gösterir; örneğin, riboz şekeri içerir ve timin yerine urasil bulunur.
    5 kaynak

    Dokudan RNA nasıl elde edilir?

    Dokudan RNA elde etmek için aşağıdaki adımlar izlenir: 1. Hücre Lizisi: Doku veya hücrelerin çeper ve zar yapıları parçalanır. 2. Santrifüj: Hücre lizatı santrifüjlenerek RNA, diğer hücresel makromoleküllerden ayrılır. 3. RNA Ekstraksiyonu: Fenol-kloroform ekstraksiyonu gibi yöntemlerle hidrofilik bileşenler (nükleik asitler, şeker, tuzlar) sıvı fazda kalır. 4. Presipitasyon: Etanol veya izopropanol eklenerek RNA presipite edilir. Bazı ticari kitler: RNeasy Mini Kit (Qiagen); RNAqueous-Micro Total RNA Isolation Kit (Ambion). RNA izolasyonu sırasında RNase içermeyen malzemeler kullanılması ve RNase aktivitesini yok eden dietilpirokarbonat (DEPC) ile hazırlanmış çözeltiler kullanılması önemlidir.
    5 kaynak

    DNA ve RNA izolasyonu nasıl yapılır?

    DNA ve RNA izolasyonu, hücrelerden bu nükleik asitlerin saf bir şekilde ayrıştırılması işlemidir. İzolasyon yöntemleri genel olarak iki ana kategoriye ayrılır: 1. Fiziksel yöntemler: Dondurma, parçalama veya santrifüjleme gibi fiziksel işlemleri içerir. 2. Kimyasal yöntemler: Fenol-kloroform ekstraksiyonu veya RNA izolasyonu kitleri gibi reaktörlerin kullanımını içerir. İzolasyon prosedürü genel olarak şu adımları içerir: 1. Örnek hazırlığı: RNA'nın izole edileceği hücre veya doku örneği uygun koşullarda hazırlanır. 2. Hücrelerin parçalanması: Örnek, RNA'yı serbest bırakmak için parçalanır. 3. Ekstraksiyon: RNA, uygun bir çözgen ile ekstrakte edilir. 4. Santrifüjleme: Ekstraksiyon işleminden sonra, santrifüjleme ile RNA'nın saflaştırılması gerçekleştirilir. 5. Saflaştırma: RNA'nın saflığı, alkol veya diğer çözücüler kullanılarak artırılır. İzolasyon işleminin doğru bir şekilde yapılması, elde edilen verilerin güvenilirliği açısından büyük önem taşır.
    5 kaynak