Yapay zekadan makale özeti
- Kısa
- Ayrıntılı
- Bu video, bir eğitmen ve öğrencisi Ece'nin yer aldığı laboratuvar ortamında gerçekleştirilen bilimsel bir eğitim içeriğidir. Bayram sabahında başlayan videoda, mikroskopla hücre boyama ve antikor testi süreçleri adım adım gösterilmektedir.
- Video, A71 ve A172 numaralı hücrelerde yapılan boyama deneyinin mikroskopla incelenmesiyle başlayıp, hücrelerin fiksasyonu, antikor testi ve son olarak mikroskobla incelenmesi aşamalarını kapsamaktadır. Deney, beyin kanseri hücrelerinin PBS ortamında yıkılması, formaldehit, gluteraldehit ve metanolle fikse edilmesi, altı farklı antikorun test edilmesi ve son olarak mikroskobla incelenmesi şeklinde ilerlemektedir.
- Videoda ayrıca laboratuvar ortamında malzeme tasarrufu yapma yöntemleri, slaytların doğru şekilde hazırlanması ve antikorların doğru kullanımı gibi pratik bilgiler de paylaşılmaktadır. Son bölümde ise Solidfy cihazı ve konfokal randevuları hakkında kısa bir sohbet yer almaktadır.
- Bayram Şarkısı
- Bugün bayram olduğu için çocuklar erken kalkıp en güzel giysilerini giymeli ve taze kır çiçekleri toplamalı.
- Bugün anneleri üzmemeli.
- 00:33Mikroskop Deneyine Başlangıç
- Bugün doktor hücrede boyama yapılacak ve ilk olarak hücreler incelenecek.
- Geçen gün A72 hücrelerine altılı kuyular ekilmiş ve bu kuyuların altında cam bulunuyor.
- Floresan mikroskop kullanılacak ancak şu an sadece normal mikroskop olarak kullanılacak.
- 02:43Mikroskop Kullanımı
- Mikroskop lameli (cover slip) kullanılıyor, bu bir slayt değil.
- Hücreler konforlu bir şekilde yerleştirilmiş, boşlukları çok az kalmış.
- Hücreler aşırı yoğun değil, üst üste binebilirler.
- 04:22Hücre Yapısı
- Inverted mikroskop kullanıldığı için hücreler aşağıdan bakılıyor.
- Hücreler yayvan görünüyor ve sınırlarını görmekte zorlanılıyor.
- Hücrelerde çekirdek ve sitoplazma bulunuyor, sitoplazma yayılmış halde.
- 05:30Hücre Konforu
- Kanser hücreleri sıkışabildiği için sitoplazmaları küçülmeye başlıyor.
- 10x objektifte hücrelerin konforlu olduğu daha iyi anlaşılıyor.
- Hücreler sıkışık olsaydı metabolizmaları değişmiş olurdu, şu anda daha rahat görünüyorlar.
- 06:47Mikroskop Ayarları
- Mikroskop ayarları ekrana bakarak yapılıyor, ikisi bir olmuyor.
- Beyaz alan ayarı yapılıyor ve ışık filtreleri kullanılıyor.
- Farklı filtreler deneniyor ve görüntü kalitesi iyileştiriliyor.
- 12:15Bayram Özel Bölüm ve Hücre Boyama
- Bayram özel bölümünde karantina döneminde sokağa çıkma yasağı olmasına rağmen deneyler devam ediyor.
- Bu sefer sekswellleri (hücreleri) boyayacaklar, geçen sefer doku boyamışlardı.
- Hücreleri fikse etmek gerekiyor çünkü şu anda yaşamaya devam ediyorlar.
- 12:55Fiksasyon Yöntemleri
- İki fiksasyon yöntemi var: formaldehit ve metanol.
- Formaldehit cross-linking yapar ancak hücreyi tam olarak öldürmez, metanol ise hücrenin canını okur.
- Formaldehit her proteini yerinde tutar ancak palmiyelization (membran açma) yapmak gerekir, metanol ise permi vizesine gerek yoktur.
- 14:19Metanol ve Formaldehit Çalışma Prensibi
- Metanol ve etanol ortamdaki suyu çekerek hücreleri kendilerine yapıştırır.
- Formaldehit proteinleri ve lipitleri cross-linking yaparak olduğu yerde tutar, hücreler hala yaşar gibi olur ve daha hassas olur.
- Bu deney antikorları optimize etmek için yapılıyor, iki yıldır kullanılan antikorların insan hücresinde ve balıkta nasıl çalıştığını inceleyecekler.
- 15:32Fiksasyon Uygulaması
- Metanol ile fiksasyon beş dakika ve soğuk (eksi yirmi derece) yapılır.
- Metanol koyarken hunharca koymamak gerekir, yavaş yavaş eklenmelidir.
- Formaldehit kullanırken yüzde dört'lük formaldehit hazırlanır, paraformaldehit toz halinde çözüp hazırlamak tavsiye edilmez çünkü çok toksik bir nörotoksik ajandır.
- 17:08Formaldehit Türleri ve Kullanımı
- Paraformaldehit, formaldehit toz hali, çözülmüş hali ve sıvı hali aynı şeydir.
- Çözündükten sonra paraformaldehit çok stabil değil, toz halindeyken veya ampul halinde alındığında daha stabildir.
- Sıvı halde veya ampullerde alınması tavsiye edilir, özellikle küçük ampuller kullanma süresi az olduğu için stabilitesini daha uzun süre korur.
- 19:25Kimyasalların Hazırlanması
- Formaldehit yüzde otuzyedi'lik olarak satılır, yüzde dört veya yüzde on kullanmak için oranlanır.
- Formaldehit genellikle PBS'ta sulandırılır ve yüzde on metanol ile stabilize edilmiş olabilir.
- Metanol eksi yirmi dereceye soğutulup bekletilir ve hücreler PBS ile yıkanır.
- 22:31Hücre Yıkama ve İşleme
- Hücreler PBS (phosphate buffered saline) içinde yıkanıyor ve bu izotonik solüsyon hipotonik değil.
- Hücreler PBS içinde rahat rahat durabilir, ayrıca aspiratör de kullanılabilir.
- Hücreler PBS'e kenarlara yavaşça bırakılarak veriliyor, şişeyi kullanmak kontamine olabilir.
- 25:25Hücre Fikse Etme Süreci
- Hücreler çok narinse fazla yıkamadan hemen formaldehit koyulabilir.
- Beta galaktostaz gibi enzimler hücrelerde bulunur ve XCL ile maviye çevrilebilir.
- Metanol lefiks işlemi yapıldıktan sonra güzel yıkamak gerekir çünkü metanol sert bir kimyasaldır.
- 27:19Blocking Hazırlama
- Blocking için Gold Serum BBSC'nin içine atılıyor, diğer seçenekler BSA veya süt tozudur.
- Hücrelerin üzerine birer mililitre soğuk meden konuluyor ve beş dakika bekletiliyor.
- Blocking için on mililitre serum kullanılıyor ve antikor hazırlamak için biraz daha fazlası ekleniyor.
- 33:02Hücre Yıkama ve Antikor Uygulaması
- Hücreler metanolden sonra PBS'e konuluyor ve ikinci PBS'e beş-altı dakika bekletiliyor.
- Antikor uygulaması için az miktarda antikor kullanılıyor, zengin bir yapıda bol bol antikor kullanılabilir.
- Hücreler PBS'de bekletildikten sonra soğuğa konuluyor ve en az yarım saat bekletiliyor.
- 38:44Antikor Testi Hazırlığı
- Altı farklı antikor belirlenmiş ve test edilecek.
- Antikorların kodları defterde yazılmış ve hangi antikorların tavşanda ve farede yetiştirildiği belirtilmiş.
- Her kuyuya farklı antikor konulacak ve antikor miktarı 1:150 ile başlanacak, daha sonra seyrek koyulabilir.
- 40:15Antikorların Hazırlanması
- 1:150 oranında antikor çözeltisi hazırlanıyor, yani 150 mikrolitre blok solüsyonuna 1 mikrolitre antikor ekleniyor.
- Antikorlar pahalı ve az miktarda geldiği için eldiven giyilerek dikkatli kullanılıyor.
- Antikorlar minik parçalara bölünerek bir şey olursa bir tanesinin başına gelsin diye korunuyor.
- 45:31Slaytların Hazırlanması
- Slaytlar ortalıyor ve etrafı kuruluyor, çok kuru veya ıslak olmamalı.
- Antikorlar slaytlara konuluyor ve etrafı kuru tutulmalı, aksi takdirde antikorlar kayabilir.
- Antikorlar slayt üzerinde "bombe" şeklinde duruyor ve etrafı taşmıyor.
- 49:18Farklı Slayt Türleri
- Farklı boyutlarda slaytlar kullanılıyor: 24 ve 96'lık.
- Çember slayt da var, bu slaytta kuyular bölünüyor ve hücreler bu kuyuların üstünde yetiştiriliyor.
- Blok işlemi en az yarım saat, en az bir saat, iki saatten uzun olacaksa +4 dereceye gitmesi gerekiyor.
- 52:34Yıkama ve Antibad Hazırlığı
- Antikorlar üzerine direkt piyes konuluyor ve üç tane beşer dakikalık yıkama yapılacak.
- Antibad hazırlanıyor, farklı renklerde (yeşil ve diğer) iki farklı antibad kullanılıyor.
- Antibadlar PBS'de hazırlanıyor ve karanlıkta durması gerekiyor.
- 55:47Laboratuvar Hesaplamaları
- Laboratuvarda Revit ve dört mouse kuyusu bulunuyor, oranlar bire beşyüz veya bire bin olarak kullanılıyor.
- Hesaplamalar sırasında miktarlar azaltılıyor, örneğin iki mililitre yerine bir buçuk mililitre kullanılıyor.
- İki farklı antikor kullanılarak negatif kontrol oluşturuluyor, Revit antikor koymadığında bas antikor kullanılıyor.
- 1:00:19Laboratuvar İşlemleri
- Laboratuvarda tasarruflu davranarak malzeme israfı önleniyor.
- Hücreler PBS (phosphate buffered saline) ile üç kez yıkandıktan sonra bir saat bekletiliyor.
- İkinci antikor mililitrede bir mikrogram olacak şekilde sulandırılıp hücrelere uygulanıyor.
- 1:06:54Mikroskop Kontrolü
- Mikroskopun floresanı açıldıktan sonra hücreler kontrol ediliyor.
- Mikroskopta iplik iplik görünen kırmızı noktalar proteinlerin varlığını gösteriyor.
- Çalışmayan ve çalışan hücreler ayrı ayrı etiketleniyor.
- 1:11:32Slayt Hazırlama
- Slaytlar için özel bir alet hazırlanıyor, şırınganın ucu bükülerek kullanılıyor.
- Hücrelerin üstüne basmadan slaytlar yerleştiriliyor.
- Baloncuklar oluştuğunda, balon olmayan yerlerden çekim yapılıyor.
- 1:18:30Oje Sürüşü Değerlendirmesi
- Görüntülenen oje sürüşü idealden çok uzak bulunuyor.
- Flormar'dan alınan oje kötü yayılmış durumda.
- Reklam yapılan oje rengi çok güzel olsa da uygulanamamış.
- 1:19:54Solidfy ve Randevu Bilgileri
- Araya koyulan videonun solidfy olması ve plastik gibi katılaşması gerekiyor.
- Konfokal'in randevularını bir hafta önceden alabiliyorlar.
- Bayramın birinci günü saat beş buçukta cihazlar dolu durumda.
- 1:20:40Eğitim ve Motivasyon
- Cuma günü bayramın ikinci gününe fark etmeden eğitim koyuluyor.
- Eğitim verecek kişi ve alacak kişi bayram günü olduğunu fark etmiyor.
- Dondurmalar motivasyon kaynağı olarak kullanılıyor.
- 1:21:14Son İşlemler
- Oje sürüşü odasında bekletiliyor ve katılaşıyor.
- Üzerine başka bir şey konuluyor.
- Karanlıkta eve gidiliyor ve kapanış "iyi uykular çocuklar" ile yapılıyor.