Yapay zekadan makale özeti
- Kısa
- Ayrıntılı
- Bu video, hücre kültürü çalışmalarında hücrelerin pasajlanması sürecini adım adım anlatan bir eğitim içeriğidir.
- Video, hücrelerin plato fazına ulaştığında yaşanan ölüm fazını önlemek için geç logaritmik fazda pasajlanması gerektiğini açıklayarak başlar. Ardından konfluence (yüzeye yapışan hücrelerin kapladığı alan) belirleme, tripsinasyon (hücrelerin yüzeyden ayrılması), santrifüjleme ve hücre sayımı gibi pasajlama sürecinin tüm aşamaları detaylı olarak gösterilir. Tripsin enziminin kullanımı, PBS ve tripsin inhibitörlerinin önemi gibi teknik detaylar da videoda yer almaktadır.
- 00:11Hücre Kültürü Çalışmalarında Pasajlama Gerekliliği
- Hücreler plato fazına ulaştıklarında büyüme medyumunun yetersizliği ve yüzeye yapışma alanı yetersizliği ölüm fazının başlamasına neden olur.
- Hücreler büyüme ve bölünmenin maksimum düzeyde olduğu geç logaritmik fazda pasajlanmalıdır.
- Konfluence (yüzeye yapışan hücrelerin kapladıkları alanın yüzde cinsinden ifade edilmesi) yaklaşık yüzde 80-90 düzeye ulaştığında hücreler pasajlanmalı veya dondurulmalıdır.
- 00:49Pasajlama İşlemi
- Hücreler konfluensi belirlemek için inkübatörden çıkarılıp mikroskop altında incelenir.
- Flas incelendikten sonra kabin içerisine alınır ve içerisindeki midyum aspire edilir.
- Flas içerisine PBS eklenir, nüfuz ettikten sonra aspire edilir.
- 01:29Tripsin İşlemi
- Tripsin eklenir ve yüzeye nüfuz etmesi için yavaşça sallanır.
- Tripsin bir proteaz enzimidir ve medium içerisinde bulunan FPS tripsin inhibitörlerini barındırmaktadır.
- Tripsinizasyon basamağından önce ortam kalsiyum ve magnezyum içermeyen PBS ile yıkanmalıdır.
- 01:59Tripsin İşleminin Tamamlanması
- Flas karbondioksit inkübatöre koyularak 2-3 dakika bekletilir.
- Karbondioksit inkübatöründen çıkarılan flask mikroskopta incelendikten sonra hücreler ayrılmamışsa flaska hafifçe vurulmalıdır.
- Tripsini inhibe etmek için flask içerisine büyüme midyumundan tripsinin iki katı kadar eklenmelidir.
- 02:27Hücrelerin İşlenmesi ve Sayımı
- Serolojik pipet yardımıyla flask içerisinden çıkarılan sıvı falcon tüp içerisine aktarılır ve santrifüj edilir.
- Santrifüjden sonra pellete zarar vermeden supernatant atılır ve taze büyüme medyumu içerisinde çözülür.
- Falcon tüp içerisinden hücre sayımı yapılmak üzere örnek alınır ve sayım işlemleri gerçekleştirilir.
- Sayım yapıldıktan sonra yeterli miktardaki hücre yeni bir flaska aktarılır.