Resident Evil 5, Afrika'nın kurak topraklarında geçen bir hikayeye sahiptir. Oyunun hikayesi kısaca şu şekildedir: Seri kahramanlarından Chris Redfield, biyolojik bir silah salgınının önüne geçmek için eski bir arkadaşı olan Sheva Alomar ile birlikte mücadele eder. Zombiler ve diğer mutant yaratıklarla dolu tehlikeli bir dünyada ilerlerken, şirketlerin karanlık sırlarını ve salgının arkasındaki güçleri ortaya çıkarmaya çalışırlar. Oyun, serinin önceki oyunlarına göre daha aksiyon odaklı bir oynanışa sahiptir.