Yapay zekadan makale özeti
- Kısa
- Ayrıntılı
- Bu video, bir eğitmen tarafından sunulan moleküler genetik yöntemleri hakkında kapsamlı bir eğitim dersidir. Eğitmen, slaytları kullanarak konuyu detaylı şekilde anlatmaktadır.
- Video, Hela B27 testi ile başlayıp, PCR yöntemi, ASO analizleri, ARP yöntemi ve elektroforez gibi moleküler tanı yöntemlerini adım adım açıklamaktadır. Özellikle ankilozan spondilit hastalığına yatkınlık oluşturan HLAB27 geninin tespiti, palindromik bölgelerin analizi ve homozigot-heterozigot mutasyonların nasıl tespit edileceği konuları ele alınmaktadır.
- Ders, moleküler metodların temelini oluşturan teknikleri ve bunların modern hastalık tespitindeki uygulamalarını örneklerle göstermektedir. Eğitmen, kendi çalışmalarının görüntülerini de paylaşarak konuyu somutlaştırmaktadır.
- 00:05Dersin İkinci Kısmına Giriş
- Moleküler biyoloji dersinin pietrofor dersinin ikinci kısmına başlanıyor ve yaklaşık 15-20 dakika sürecektir.
- Ders 40 dakikalık olmasına rağmen, bu bölüm yaklaşık 15-20 dakika sürecektir.
- Ders sırasında detaylara çok girilemeyecek, ancak anlaması için yeterli süre sağlanacaktır.
- 01:03Hela B27 Testi Hakkında Bilgi
- Hela B27 testi, laboratuvarda halihazırda rutin olarak yapılan ve kullanılan bir testtir.
- Bu test çok eski olmasına rağmen geçerli ve kullanışlı bir yöntemdir.
- Real-time PCR ve jentraforoz yöntemleri piyasada kalkarken, Hela B27 testi hala en ucuz ve kullanışlı yöntemlerden biridir.
- 01:56Hela B27 ve Ankilozan Spondilit
- Hela B27 testinde Hela B20'den farklı bir tür incelenmektedir.
- Hela'nın değişkenliği hastalık yapıcı faktör değildir, polimorfizmdir ve hastalığa yatkınlık oluşturabilir.
- Hela B27, ankilozan spondilit hastalığını tespit etmek için kullanılır; bu hastalık bel bölgelerinde omuriliklerin kireçlenmesi, birbirine yapışması ve ağırlaşması ile karakterize olur.
- 02:54HLA-B27 Geninin Ankilozan Spondilit İlişkisi
- Ankilozan spondilitli hastalarda HLA-B27 geninin bulunması zorunlu değildir, ancak hastaların %95'inden fazlasında bu gen vardır.
- HLA-B27 geninin hastalık yapıcı bir gen olmadığı, ancak hastalığa yatkınlık oluşturan bir gen olduğu belirtilmektedir.
- Ankilozan spondilit şüphesi olan hastalarda HLA-B27 geninin varlığı tespit edilmelidir.
- 03:57PCR Testinde Kullanılan Primerler
- HLA-B27 geninin tespiti için forward (ön) ve reverse (arka) primerler kullanılır, bu primerler yaklaşık 19 nükleotit uzunluğundadır.
- PCR testinde hem forward hem reverse primerler birlikte kullanılır ve bu primerler DNA'nın belirli bir bölgesine bağlanır.
- Testte ayrıca kontrol gen olarak P53 geninin primerleri de kullanılır, bu gen herkeste bulunur ve testin doğruluğunu kontrol etmek için kullanılır.
- 07:22PCR Testinin Önemi ve Uygulanması
- Genetik test sonuçları kimlik kartı gibi sabittir ve geri dönüşümü yoktur, bu nedenle test sonuçları net ve doğru verilmelidir.
- Bir hasta için iki kuyu PCR'a konulur, biri kontrol için P53 geninin primerleri, diğeri HLA-B27 geninin primerleri ile doldurulur.
- PCR sonucunda jele yüklendikten sonra bantlar görülür; hızlı yürüyen bant HLA-B27 geninin, yavaş yürüyen bant ise P53 geninin bantıdır.
- 10:29Test Sonuçlarının Yorumlanması
- İki tüpte de aynı bantların görülmesi, hastanın HLA-B27 geninin pozitif olduğunu gösterir.
- Bir tüpte sadece P53 geninin bantı görülürken HLA-B27 geninin bantı görülmezse, hastanın HLA-B27 geninin negatif olduğu anlaşılır.
- PCR testinde iki tüpte de aynı bantların görülmesi, testin doğruluğunu kontrol etmek için önemlidir.
- 12:37PCR Test Sonuçları
- Görüntülerde hastaların PCR test sonuçları gösteriliyor; bazı hastalar pozitif, bazıları negatif olarak belirleniyor.
- P53 bantları daha geride kalır çünkü daha uzun bir bölge elde edilir ve bu hastalara negatif denir.
- Pozitif hastalar genellikle teyit amaçlı kullanılır ve pozitif bantlar net bir şekilde görülmelidir.
- 13:42ARP Yöntemi
- ARP (Amplifiye Edilmiş Parçaların Uzunluk Polimorfizmi) farklı bir analiz yöntemidir ve modern teknolojik yöntemlerin geliştirilmiş halleridir.
- Genlerimizde palindromik bölgeler vardır, yani tersiyle kendisi aynı olan diziler bulunur.
- Bu yöntem özel bölgelere uygulanabilir ve ilk kullanılan, en önemli teşhis amaçlı yöntemlerden biridir.
- 15:02Restriksiyon Enzimleri
- DNA'nın uzun zincirini kırmak için restriksiyon enzimleri (kesen enzimler) kullanılır.
- Restriksiyon enzimleri, bazı bakterilerden elde edilen ve belirli dizileri kesen enzimlerdir.
- Eko-R1 gibi restriksiyon enzimleri sadece belirli palindromik bölgeleri keser, bu sayede mutasyonların varlığı tespit edilebilir.
- 17:01ARP Yönteminin Uygulanması
- Mutasyonların varlığını tespit etmek için önce o bölgede palindromik bölge olup olmadığı kontrol edilir.
- Palindromik bölgeyi kesen bir restriksiyon enzimi bulunur ve bu enzim sipariş edilir.
- PCR ile mutasyonu tespit edeceğimiz bölgeyi içine alan 100-150 baz uzunluğunda bir dizi çoğaltılır ve bu amplikonlar restriksiyon enzimi ile bir gece bekletilir.
- 21:29Elektroforezi
- Enzim diziyi bulup keser ve ertesi gün jel elektroforezi yapılır.
- Elektroforezi jelle yüklenerek DNA'nın çoğalması sağlanır.
- Bu yöntem, genlerdeki mutasyonları ve polimorfizmleri analiz etmek için kullanılır.
- 21:58Enzim Seçimi ve Mutasyon Tespiti
- 87 baz uzunluğundaki palindromik bir bölge inceleniyor ve enzimin hangi noktadan keseceği belirleniyor.
- Enzim seçimi mutasyon bölgesine göre yapılabilir, ancak mutasyon bölgesi bulunamazsa normal diziye göre de enzim seçilebilir.
- Normal diziyi kesen enzim, mutasyonlu diziyi kesemez ve bu durumda 87 baz uzunluğundaki tek bir bant elde edilir.
- 25:09Elektroforez Sonuçları ve Mutasyon Türleri
- Mutasyonu kesen enzim kullanıldığında, normal dizi olmayan hastalarda 87 baz uzunluğundaki bant yerine 32 ve 55 baz uzunluğundaki iki farklı bant görülür.
- Hem 87 baz uzunluğundaki kesilmeyen normal dizi hem de 32 ve 55 baz uzunluğundaki mutant dizi olan hastalara heterozigot mutasyonlu denir.
- Hem 87 baz uzunluğundaki kesilmeyen normal dizi olmayan hastalara homozigot mutant denir.