54 filmi, 1970'lerde New York'ta ünlü bir gece kulübü olan Studio 54'ün hikayesini anlatıyor. Bir antoloji sayılabilecek film, çeşitli karakterler üzerinden bir dönemin efsanesini yeniden canlandırıyor. Filmin konusu kısaca şu şekilde özetlenebilir: Umutsuzlukla mücadele eden ve dağılmanın eşiğindeki karakterler üzerinden bir dönemin efsanesi anlatılıyor. Up-and-comer Shane O'Shea, büyük şehir hayallerini gerçekleştirmek için Studio 54'te çalışmaya başlıyor. Kulüp sahibi Steve Rubell'in dikkatini çektikten sonra hızla barmenliğe yükseliyor. Aynı zamanda, Anita Randazzo şarkıcılık kariyerinde büyük bir çıkış yapmaya çalışırken, Shane, sabun operası yıldızı Julie Black'e aşık oluyor.