Harley Quinn'in gerçek kötüsü olarak kabul edilebilecek bir karakter yoktur. Harley Quinn, DC Comics'teki kötü kahramanlardan biridir ve genellikle Joker ile ilişkilendirilir. Joker, Harley Quinn'in sevgilisi ve ortağıdır, ancak Harley'in en büyük düşmanı olarak kabul edilmez 34.

Harley Quinn'in en büyük düşmanı olarak genellikle Poison Ivy ve Catwoman gibi diğer kötü karakterler gösterilir. Poison Ivy, Harley'e süper-insan gücü ve toksinlere karşı bağışıklık kazandıran antitoksinleri enjekte etmiştir 34.

Sonuç olarak, Harley Quinn'in en büyük düşmanı olarak belirli bir karakter yerine, daha çok Joker ve Poison Ivy gibi karakterler öne çıkar.