Jamestown'un sona ermesinin birkaç nedeni vardır: 1. Hastalık ve Açlık: Kolonistlerin %80'den fazlası, özellikle 1609-10 kışında, hastalıktan ve yiyecek yetersizliğinden öldü. 2. Yerlilerle Çatışmalar: Powhatan yerlileri ile yaşanan anlaşmazlıklar ve saldırılar, koloninin güvenliğini tehdit etti. 3. Kötü Yönetim: İlk liderlerin yetersizliği ve koloninin doğru şekilde yönetilememesi, Jamestown'un çöküşüne katkıda bulundu. 4. Ekonomik Sorunlar: Koloninin finansal hedefleri gerçekleşmedi ve ekonomik kalkınma sağlanamadı. 1699'da Jamestown, resmi olarak Virginia'nın başkenti Williamsburg'a taşındı ve koloninin sonu gelmiş oldu.